VIHlab

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LABORATORIO Y
DIAGNÓSTICO EN VIH
DRA. SILVIA ARREDONDO D.
MEDICO INMUNOLOGO-CLINICO
HOSPITAL REGIONAL DE TALCA
VIH
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El VIH es un virus de la familia de los lentivirus.
Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH-2, que son
muy similares pero tienen diferencias genéticas.
Se ha demostrado que son virus altamente
complejos tanto a nivel estructural como en su
evolución.
Los VIH-1 se clasifican en tres grupos distintos
(M,N,O), el más importante es el grupo M que se
subdivide en 9 subtipos de la A a la K. En América
del Norte, Central y Sudamérica predomina el
grupo B.
La variabilidad de estos virus se expresa en nuevas
formas recombinantes que pueden generar una
VIH
GENERALIDADES
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El diagnóstico de la infección VIH, sólo puede
establecerse mediante análisis por métodos de
laboratorio.
Los exámenes orientados a establecer el diagnóstico se
pueden clasificar en métodos indirectos y directos.
Desde punto de vista del seguimiento y del pronóstico
de la infección VIH, y del SIDA, también es necesario el
apoyo del laboratorio.
El laboratorio también es de gran utilidad en el
diagnóstico de enfermedades oportunistas que
presentan los portadores de VIH.
PRUEBAS SEROLOGICAS
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Detección de anticuerpos anti VIH-1, su presencia
reflejan estado de portación actual.
Se realiza mediante pruebas de screening, las que si
resultan positivas luego son confirmadas por test de
mayor especificidad.
La seropositividad se define mediante la
reactividad repetida a las pruebas de screening (2
TEST positivos) confirmados posteriormente con una
prueba confirmatoria.
TEST DE SCREENING Y CONFIRMACIÓN
TEST DE SCREENING
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El método más utilizado es el enzimoinmunoanálisis
(EIA), existiendo técnicas de primera , segunda y
tercera generación dependiendo del origen de los
antígenos virales.
Sensibilidad de las técnicas actuales alcanza un 99
%.
Los EIA de tercera generación son los utilizados en
la actualidad por su mayor sensibilidad y
especificidad.
Existen también pruebas de detección rápida
basadas en principios de aglutinación y las de
inmunoadherencia (dot-blot), siendo menos
especificas que las anteriores.
En la actualidad además se dispone de kit que
permiten detectar ambos tipos de virus VIH (1 y 2).
TEST CONFIRMATORIOS
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El Western blot es el más utilizado en la confirmación de los
resultados obtenidos por screening.
El WB, permite distinguir contra que antígenos virales se
dirigen los anticuerpos de la muestra a estudiar.
Existen diversos criterios de positividad de acuerdo a
diferentes instituciones que los han definido, la OMS en
reunión de expertos en 1990 recomendó la presencia de al
menos 2 bandas de la envoltura .El resto de los patrones se
considera indeterminado.
Las limitaciones del WB son la complejidad de la técnica, su
alto costo, la necesidad de personal altamente especializado.
Además la variabilidad de la reactividad de las bandas (
gp160,gp120,p24, p17 y la gp41). También existe diferente
valor predictivo diagnóstico la existencia de las diferentes
bandas. Las bandas de proteínas de la envoltura son las más
especificas con bajo % de falsos (+)
CAUSAS DE WB INDETERMINADO
PARA VIH-1
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Infección por VIH-2.
Seroconversión para el VIH-1.
Pacientes en estadios muy avanzados de la
enfermedad.
Niños nacidos de madres seropositivas.
Individuos africanos infectados.
Reactividad inespecífica.
PRUEBAS SUPLEMENTARIAS
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Inmunoanálisis de tipo lineal (LIA).
RIPA.
Antigenemia (medición de p24), que permite el
diagnóstico durante la primoinfección, en hijos
de madres VIH(+), monitorización de respuesta
a TARV en algunos portadores, identificación de
individuos seropositivos con elevada
infectividad.
Cultivo viral.
PCR (detección de ácidos nucleicos ).
CAUSAS DE PCR (+) EN INDIVIDUOS
SERONEGATIVOS PARA VIH
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Período de ventana antes de la
seroconversión.
Contaminación de laboratorio.
Secuencias exógenos de tipo retroviral.
Secuencias endógenas retrovirales o no.
Hipogamaglobulinemia.
Infección por virus defectivos o incompletos.
Infecciones por variantes poco o no
replicativas.
Serorreversión por disfunciones en el sistema
inmunitario.
CAUSAS DE PCR (-) EN INDIVIDUOS
SEROPOSITIVOS PARA EL VIH
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Transmisión pasiva ( materno-fetal,
transfusiones, etc.)
Mutaciones críticas en la región analizada.
Presencia errática de la secuencia
estudiada.
Baja sensibilidad de la prueba.
Error técnico.
Anticuerpos con reactividad cruzada en
pacientes con LES, FQ, post vacuna
antiinfluenza (sólo en estos casos no hay
infección VIH).
ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN VIH
EN INDIVIDUOS SIN RIESGO
ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN VIH
EN INDIVIDUOS CON RIESGO
EL LABORATORIO EN EL SEGUIMIENTO Y
PRÓNOSTICO DE LA INFECCIÓN VIH
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Existen exámenes específicos para establecer
el pronóstico y clasificación de los pacientes
VIH (+), (Carga viral y recuento de
LTCD4(+)) y otros que se solicitan en la
primera consulta que serán de utilidad en el
seguimiento del paciente y de las
enfermedades oportunistas que puedan
aparecer (que se listan a continuación)
Los exámenes generales nos permiten
conocer la situación basal del paciente en
relación a otras infecciones latentes,
dislipidemias, alteraciones metabólicas,
cáncer, etc..
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS QUE DEBEN
REALIZARSE A PACIENTES VIH(+)
HEMOGRAMA Y VHS
SI
3-6 MESES
2 A 3 MESES
PERFIL BIOQUIMICO
SI
3 A 6 MESES
2ª 3 MESES
PERFIL LIPIDICO
SI
3 A 6 MESES
2 A 3 MESES
ACIDO ÚRICO
SI
3 A 6 MESE
2 A 3 MESES
AMILASA Y LIPASA
SI
3 A 6 MESES
2 A 3 MESES
ORINA COMPLETA
SI
3 A 6 MESES
2 A 3 MESES
RX TORAX
SI
SP
SP
ECG
SI
SP
SP
PPD
IDEAL SI
SP
SP
SER. VIRUS HEPATITIS B Y C
SI
NO
NO
SER. TOXOPLASMA GONDII
SI
SP
SP
SER. CMV.
SI
SP
SP
VDRL
SI
SP
SP
PSD
SI
SP
SP
COPROCULTIVO
SI
SP
SP
LT CD4(+)
SI
3-6 MESES
2-3 MESES
CARGA VIRAL VIH
SI
3-6 MESES
2-3 MESES
LT CD4 (+)
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La cifra de LTCD4(+) de sangre periférica
corresponde aproximadamente a un 2% de los LT
CD4 (+) totales.
Varían durante el día, y día a día, la variabilidad
usando métodos automatizados es de un 2 a 5 %.
Se utiliza actualmente para su determinación la
citometría de flujo (FACS).
Los errores se originan por la demora en el
procesamiento y tienden a aumentar por unión
inespecífica de los anticuerpos en las muestras
congeladas.
Se requieren a lo menos 2 determinaciones de
LTCD4(+) si se debe tomar una decisión terapéutica
en los portadores y para su clasificación.
SITUACIONES QUE ORIGINAN
ALTERACIÓN EN LOS LTCD4(+)
Ejercicio intenso: ↓ LTCD4(+).
 Variaciones diurnas: aumenta en 50-150 células en
el día.
 Tabaquismo: ↓ por efecto de la nicotina.
 Corticoides: ↓ linfocitos totales y CD4(+).
 Bazo: aumenta en pacientes esplenectomizados,
en los cirróticos con hipertensión portal disminuyen.
 En las mujeres embarazadas disminuyen los
LTCD4(+) en el tercer trimestre.
 En los procesos inflamatorios agudos sean o no
infecciosos disminuyen los CD4(+).
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CARGA VIRAL
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Consiste en la detección por medio de la
amplificación de las secuencias de ácidos nucleicos
del ARN del VIH.
Se logra su detección gracias al avance que ha
experimentado la biología molecular.
Su detección ha permitido demostrar la
modificación que realiza la TARV sobre la historia
natural de la infección VIH.
Depende del método empleado y la capacidad de
detectar mínimas cantidades de ARN del virus.
Se expresa en copias de ARNv /ml .
Posee las principales características se un buen
marcados de laboratorio: Sensibilidad,
especificidad, valor predictivo positivo y negativo y
reproducibilidad.
PROPIEDADES DE LA CARGA
VIRAL
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La CV plasmática es la resultante del
equilibrio dinámico entre los distintos
compartimientos virales.
El descenso de la CV luego del inicio de la
TARV consta de tres fases ( LTCD4(+)
infectados productivos), (macrófagos
tisulares, y otros reservorios del
virus)(incierto).
Son reproducibles.
No existe equivalencia directa entre los
diferentes métodos utilizados
comercialmente.
INDICACIONES CLINICAS Y USO DE CV
INDICACIÓN CLÍNICA
INFORMACIÓN
USO
SD. Compatible con
infección aguda VIH
Establece el diagnóstico
cuando la prueba de
anticuerpos es negativa o
indeterminada
Diagnóstico
Valoración inicial de una
infección VIH recientemente
diagnosticada
CV basal
Apoya decisión en conjunto
con CD4(+) de iniciar o no
tratamiento
Control de pacientes VIH(+)
sin TARV
Cambios de la carga viral
ídem
Luego de 4 semanas del
inicio o cambio de TARV
Valoración inicial de
eficacia de TARV
Decisión de continuar o
cambiar esquema
Control c/3-4 meses en
pacientes con TARV
Duración del efecto
antiretroviral
Decisión de continuar o
cambiar TARV
Acontecimientos clínicos o
disminución significativa de
LTCD4(+)
Asociación con CV variable
o inestable
ídem

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