Salmonella

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Azucena
Anabel
Alba
Guadalupe
Liliana
PRACTICA 2
“Detección de Salmonella en
Alimentos”
Salmonella

Salmonella es un género de bacteria que pertenece
a la familia Enterobacteriaceae
Bacilos gram negativos
Anaerobios facultativos
Flagelos perítricos
No desarrollan cápsula ni esporas
Bacterias móviles
Producen sulfuro de hidrógeno (H2S)
Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada,
pero no lactosa
 No producen ureasa.








Se transmite por contacto directo o contaminación
cruzada durante la manipulación, en el procesado de
alimentos o en el hogar, también por vía sexual.
MEDIOS A UTILIZAR:
Agua Peptonada
 Caldo Urea
 Caldo Rappaport Vassiliadis
 Agar BGA (Agar Verde Brillante)
 Agar TSI (Agar Triple Azúcar Hierro)
 Agar XLD (Agar Xilosa Lisina Desoxicolato)
 Agar Citrato de Simmons
 Agar LIA (Agar Lisina Descarboxilasa)

AGUA PEPTONADA

Medio usado como diluyente y para enriquecimiento
bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de
interés sanitario.

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para
ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar
células de enterobacterias dañadas por procesos
fisicoquímicos, a los que ha sido sometido el alimento.

Compuesta por:
 Peptona de carne
 Cloruro de Sodio
CALDO UREA

Se utiliza para la valoración de la producción
de ureasa por algunas enterobacterias. Este
medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo
de fenol. Las bacterias que producen ureasa a
partir de la urea dan lugar al carbonato de
amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura.
CALDO RAPPAPORT VASSILIADIS

Es un medio líquido para el enriquecimiento
selectivo de Salmonella a partir de carne vacuna
y productos lácteos, heces y agua contaminada.

Este medio se utiliza para el aislamiento de
Salmonella diferente de Salmonella Typhi a
partir de muestras alimentarias y fecales
AGAR BGA

Medio de enriquecimiento altamente
selectivo para el aislamiento de Salmonella
spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a
partir de muestras clínicas, alimentos, y
otros materiales de importancia sanitaria.
AGAR TSI

El Agar-hierro-triple azúcar (TSI) es un medio de cultivo, es uno de los
medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias
según:

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


Fermenten o no glucosa.
Fermenten o no lactosa o sacarosa.
Produzcan o no ácido sulfhídrico.
Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre Agar TSI son:




Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de
glucosa, el medio permanecerá de color rojo.
Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidificará el medio en su superficie
volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará
de color rojo.
Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará
un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el consiguiente
ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo),
pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de
gas.
AGAR CITRATO DE SIMMONS

El Agar Citrato de Simmons es un medio utilizado para la
diferenciación de enterobacterias en base a su capacidad de
utilizar el citrato. Este medio es recomendado para el estudio
de enterobacterias a partir de muestras clínicas, de agua y
alimentos.

Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio
como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y
azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias
capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este
medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la
eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte
basificación del medio que será aparente por un cambio de
color del indicador de pH, de verde a azul.
AGAR LIA






La peptona de gelatina funciona como soporte de crecimiento, el extracto de
levadura proporciona la fuente de vitaminas necesarias y la dextrosa el
carbohidrato fermentable.
En este medio se observa la fermentación de glucosa, producción de ácido
sulfhídrico, la descarboxilación u desaminación de la lisina.
Los microorganismos tienen enzima descarboxilasa, descarboxilan el aminoácido
lisina a cadaverina (amina primaria, liberando CO2) , debido a la alcalinidad, el
pH se modifica con los siguientes resultados: La prueba se considera POSITIVA si
la coloración en el fondo se observa morada o violeta-púrpura.
NEGATIVA si la coloración en el fondo es amarilla y la superficie permanece del
color del medio, ya que solo hay fermentación de glucosa.
La desaminación de la lisina a ácido cetocarbónico, este forma compuestos
pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la sal de hierro y por la acción del
oxigeno.
La formación del ácido sulfhídrico da una coloración negra debida al sulfuro de
hierro producido.
PROCEDIMIENTO

Se Divide en:
 Preenriquecimiento
 Enriquecimiento
 Aislamiento
 Identificación Bioquímica
PREENRIQUECIMIENTO

Transferir asépticamente 25ml o 25gr
de muestra a un matraz de 225ml
de Agua Peptonada

Licuar si fuera necesario (muestras
solidas) durante un minuto

Incubar a 35°C durante 24hrs.
ENRIQUECIMIENTO

Transferir 0.1ml del cultivo anterior a un
tubo de 9.9ml de caldo Rappaport
Vassiliadis

Incubar 24hrs. A 42°C
AISLAMIENTO

Sembrar por estría simple 2 placas de Agar
XLD y BGA

Incubar 24hrs a 37°C
IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA

Selecciona al menos dos colonias típicas
sospechosas que se encuentren bien
aisladas de cada placa

Transferir con un asa cada colonia
seleccionada a la siguiente serie de tubos
que contiene los siguientes medios:
Agar TSI
 Agar LIA
 Agar Citrato de Simmons

 Sembrar por picadura en el fondo y por estría
en la superficie.

Caldo Urea
 Inocular el Caldo

Incubar los tubos de esta prueba a 35 C por
24hrs.

Comprobar los resultados de las pruebas
bioquímicas con la tabla de resultados de los
microorganismos enteropatogenos.
¡GRACIAS POR SU
ATENCION!

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