Presentacion TP Reproductor 2014

Report
Trabajo Práctico
Sistema Reproductor
en Mamíferos
Cambios en la Fisiología Ovárica-Uterina
durante el ciclo estral
Ciclos Reproductivos

Sucesión periódica de ciertos procesos
o etapas de la fisiología ovárica que se
dan como consecuencia de variaciones
hormonales y se manifiestan en cambios
morfo-funcionales en los órganos
reproductivos femeninos (vagina, útero,
oviductos).
Tipos de ciclos en mamíferos
Menstrual
Estral

En primates


La hembra es receptiva
durante todo el ciclo.


Finaliza con la necrosis
del endometrio

En la mayoría de los
mamíferos
La hembra sólo es
receptiva durante un
período del ciclo (celo o
estro).
No hay necrosis del
endometrio.
Clasificación de las Especies
según su ciclo estral
Especies Monoéstricas: 1 ciclo por año con una
fase de anestro prolongada. Ej: perra.
Especies Poliéstricas: 2 o + ciclos por año.
Continuas: Ciclos estrales durante todo el año.
Ej: vaca, cerda, rata, ratona.
Estacionales: Ciclos sólo se producen en una
estación determinada del año. Ej: oveja,
cabra, yegua.
CICLO ESTRAL
PROESTRO
ESTRO
METAESTRO
DIESTRO
Foliculogénesis
Ovulación
Crecimiento
rápido
Maduración
Comienza a
las 10 hs
Post-pico de
LH
Luteogénesis
inicial
Luteogénesis
madura
Luteólisis
Proestro
Estro
Metaestro Diestro
Regulación hormonal eje HH-Ovario
Etapas del Ciclo Estral

Proestro: periodo de crecimiento folicular que se
inicia con la regresión del cuerpo lúteo y culmina con
la aparición del estro (FSH)
Cambios conductuales aumentan
posibilidad de apareo

Estro: periodo de receptividad sexual, al final del cual
se produce la ovulación (LH )
Manifestación externa CELO


Metaestro: periodo de desarrollo inicial del cuerpo
lúteo que comienza al final del estro (PG)
Diestro: periodo de actividad del cuerpo lúteo
maduro posterior a la ovulación y finaliza con la
lúteolisis (PG y E)
Ciclo Ovárico en Roedores
Duración total del ciclo estral
en ratón: 4-5 días
Factores que modifican el ciclo estral






Estado hormonal/hormonas exógenas
Disruptores endocrinos
 Contaminantes
 Tóxicos (pesticidas, herbicidas)
 Drogas de uso y abuso (psicofármacos, alcohol, cocaína)
Estado Nutricional
Estrés
Cambios ambientales (temperatura, fotoperíodo)
Intervenciones quirúrgicas de órganos reproductores
Objetivos del TP
Conocer el ciclo estral en mamíferos usando un
modelo experimental de hembras de ratón
Observar e interpretar los cambios en el ciclo
estral y en el aparato ovárico- uterino-vaginal
durante el ciclo estral
Estudios y Procedimientos
del Trabajo Práctico
Primer Paso:
Pesar los animales (peso corporal total en mg)
Estudio del Ciclo estral del ratón por la
técnica de Citología Vaginal:
Extracción del Frotis Vaginal
 Fijación y Coloración
 Observación al Microscopio
 Determinación del estado del ciclo por
cuantificación de los tipos celulares:



Identificar y esquematizar los tipos celulares
según sus características morfológicas
calcular %
Fijación y coloración
1) Fijación en metanol
2) Pasaje por alcohol 50%
3) Lavado con agua destilada
4) Coloración con hematoxilina
5) Lavado con agua corriente
6) Pasaje por agua destilada
7) Pasaje por alcohol 70%
8) Coloración con Orange G
9) Pasaje por alcohol 70%
10) Coloración con Eosina
11) Pasaje por alcohol 70%
1 min. (campana)
1 min.
1 min.
10 min.
30 seg.
1 min.
1 min.
6 min.
1 min.
30 seg.
1 min.
Principales células reconocibles
en un Frotis Vaginal
Parabasales
Intermedias
Leucocitos
Superficiales
Queratinizadas
Citología Vaginal en los estadíos del ciclo
Proestro
Estro
Parabasales
30%
--
pocas
60-70%
Intermedias
60%
Pocas
30%
30%
Superficiales
Pocas
30%
30%
pocas
--
70%
30%
---
Queratinizadas
Leucocitos
--
--
Metaestro Diestro
Muchos
Pocos (ojo)
(ojo)
PROESTRO
PB
IN
+
Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN)
Eritrocitos y neutrófilos (+)
ESTRO
SP
Q
Celulas Superficiales (SP) y Queratinizadas (Q).
DIESTRO
+
PB
IN
Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN) y neutrófilos (+)
Tabla por grupo
Número
de jaula
PB
IN
SP
Q
Leucocitos Fase del
ciclo
Tabla general
Número
de jaula
Proestro Estro
Metaestro Diestro
Otro
Estudio sobre Ovario y Útero

Disección del aparato genital femenino.
Útero Bicorneo

Reconocimiento y observación de las partes bajo lupa:
Ovarios

Oviducto

Cuernos uterinos

Cérvix
Separación de ovarios, oviducto y útero


Ovario
Oviductos
útero
Ayuda experimental: Eliminar toda la grasa del útero, cortar el cervix al ras del
útero y separar los ovarios, poner el útero sobre un papel para facilitar la
eliminación de la grasa. Pasar a papel de aluminio y pesar. Luego poner en una
caja de Petri con solución fisiológica y observar a la lupa.
Estudio del estado Uterino



Pesado del útero (mg)
Observar y describir aspecto general:
color, irrigación, volumen, grosor y tamaño.
Calcular Índice Útero Somático (IUS)
Número Peso
de jaula Corporal (mg)
Peso
Útero (mg)
IUS
IUS = peso útero/ peso corporal x 100
Estado
del Ciclo
Estudio del estado Ovárico


Observar cuerpos lúteos (CL) y folículos (FL)
Cuantificar presencia de CL.
Ayuda experimental:
Eliminar la mayor cantidad
de grasa posible de los
ovarios para favorecer su
visualización. Colocar el
ovario en una caja de Petri
con solución fisiológica y
observar bajo la lupa.
Número de
jaula
Fase del ciclo Cantidad de CL
Stage
Ovary
Uterus
Vagina
Smear
Diestrus
Small follicles only are present
with large corpora lutea from
the previous ovulation. These
secrete for only a very short
time unless pregnancy or
pseudopregnancy intervene.
Small and anaemic, low
motility, lumen small and slitlike. Cells of the uterine
mucosa columnar;
polymorphonuclear leucocytes
in stroma; endometrial glands
collapsed, atrophic.
Epithelium thin, mitotic figures
infrequent. Leucocytes
abundant in stroma, migrate
through the epithelium into
vaginal lumen.
Stringy mucous in which are
entangled many leucocytes
and a few nucleated epithelial
cells.
Some follicles grow rapidly.
Become more vascular, water
content increases, organ
distends. Contractility more
pronounced. Epithelial cells
become higher (continuing into
estrus). Leucocytes disappear
from mucosa. Endometrial
glands hypertrophy.
Epithelum thickens, numerous
mitoses in inner layers. Old
layers of epithelium line the
Largely small, round, nucleated
lumen. Leucocytes no longer epithelial cells, singly or in
migrate through the epithelium. sheets. None to few leucoytes.
Superficial epithelial cells
slough off into lumen.
Ovulation in the rat is
spontaneous and occurs about
10 hours after the beginning of
estrus. "Heat" (receptivity) lasts
about 13 hours. Usually 10-20
eggs ovulated each time.
Outer layer of epithelial cells
become cornified and sloughed
into the lumen. In early estrus
gains maximum
these cells retain their nuclei,
vascularisation. Epithelial cells
but in later stages no nuclei
reach maximum development.
visible and the cells are
No leucocytes.
irregular, flat, cornified plates.
The skin around the vaginal
orifice becomes swollen.
Many corpora lutea, which
secrete only for a very short
time, and small follicles.
Deeper layers of the estrous
epithelium now line the lumen,
Epithelium continues vacuolar the older, superficial layers
degeneration and replacement. having become cornified and
Many leucocytes and a few
Leucocytes in stroma.
sloughed off. Reduction of
cornified cells.
Decrease in size and
mitotic activity in epithelium.
vascularity.
Leucocytes in stroma and
migrating through the
epithelium into the lumen.
Proestrus
Estrus
Metestrus
Contains hundreds of large
cornified cells (squames) with
degenerate nuclei. Towards
the end of estrus the smear
becomes "cheesy" - masses of
adherent cornified cells.

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