組織製備方法

Report
組織免疫染色
研究部
黃欣儀
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組織製備方法
 Paraffin embedded method
 Frozen section method
 Vibratome section method
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Perfusion
Saline
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PFA
Paraffin embedded method
 石蠟包埋法是將樣本經由固定、脫水、澄清、浸蠟後
包埋在石蠟中,是製作光學顯微鏡切片的常規方法。
它有許多優點,操作簡易便於掌握,可進行連續切片,
包埋後的組織可以長期保存。
 包埋過程中須使用二甲苯,並且石蠟浸潤過程中需加
熱處理。
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Frozen section method
 冷凍切片法是將樣本經由固定、抗凍脫水後包埋於冷
凍切片劑中,是製作免疫切片的常規方法。優點是抗
原保存性較佳,可切薄片,包埋後的組織可以長期保
存。缺點是操作需技術,進行連續切片困難度較石蠟
切片高。
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Cryoprotection
Protect biological tissue from freezing
damage (damage due to ice formation).
Cryoprotectants
operate
simply
by
increasing the solute concentration in cells
In order to be biologically viable
Cryoprotectant must (1) easily penetrate
cells, and (2) not be toxic to the cell
Common cryoprotectants:
 Sucrose
 DMSO (dimethyl sulfoxide)
 Glycerol
 Ethylene glycol
 Propylene glycol
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Vibratome section method
 振動切片法可針對新鮮或經過固定處
理的樣本進行切片,樣本無需冰凍,
是製作免疫切片的方法之一。優點是
無冰晶形成,也可避免脫水、澄清及
包埋對抗原的傷害,因此抗原的保存
性最佳。缺點是樣本無法長期保存,
切片染色需以漂浮法進行,而且無法
進行薄切。
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切片方法
樣本製備
樣本保存
切片厚度
抗原保存性
染色難易度
石蠟切片
繁複
室溫長期
最小3mm
最差
操作簡便,但步驟
多
冷凍切片
簡單
冷凍長期
最小10mm
佳
操作方便
振動切片
簡單
短暫
最小20mm
最佳
操作需小心,但步
驟同冷凍切片
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