FH - Copy

Report
Familial hypercholesterolemia
(FH)
BACKGROUND AND OBJECTIVES
Familial hypercholesterolemia (FH) is an autosomal disorder
characterized by increased levels of total cholesterol and low density
lipoprotein cholesterol.The FH clinical phenotype has been
associated with increased risk of coronary heart disease and premature
death. The mutation in LDLR gene in most cases is responsible for FH
phenotype. Furthermore, other gene mutations such as apolipoprotein
B- gene may cause similar results. Preliminary research indicates that
the FH phenotype is also influenced by other genetic and
environmental Factors; therefore, routine clinical analysis such as total
cholesterol and LDL-C levels in serum, for early diagnosis and
treatment, are not sufficient. Molecular diagnostic investigations,
because of high specifity and sensitivity near %100, administered for
determining the prevalent mutations in LDLR (and probably other
genes) are needed for exact diagnosis and accurate therapy. Currently,
PCR-SSCP and southern blotting techniques are among the common
techniques that could detect major mutations in gene. Because of wide
diversity in kinds of mutations in LDLR gene, we recommend, first,
determining the proband's mutation and kinds of mutation, then,
performing routine test based on type of mutation.
‫‪TWO FORMS OF FH‬‬
‫‪ -1‬فرم هتروزیگوت‪ ،‬که بیمار داراي یک آلل سالم و یک آلل جهش‬
‫یافته است که شایعترین فرم بوده و میزان شیوع آن در جوامه‬
‫بشري حدود یک تولد در ‪ 500‬تولد می باشد افراد هتروزیگوت با‬
‫افزایش شدید کلسترول و‪ LDL-C‬پالسما در اوائل دوران‬
‫کودکی مواجه هستند ‪.‬که این افزایش بصورت گزانتوم تاندونی و‬
‫افزایش قابل توجه خطر بیماريهاي قلبی‪-‬عروقی زودرس مشاهده‬
‫میشود ‪.‬خوشبختانه در صورت تشخیص سریع و قطعی‪ ،‬مبتالیان‬
‫به این فرم نسبت به درمان پاسخ خوبی می دهند ‪.‬کنترل مناسب‬
‫سطح پالسمائی کلسترول در اکثر هتروزیگوتها قابل حصول‬
‫میباشد‪ .‬این امکان از راه ترکیبی از رژیم غذایی مناسب‪ ،‬درمان‬
‫داروئی و کاهنده انتخابی ‪ LDL-C‬فراهم می آید‪.‬‬
‫‪‬‬
‫‪TWO FORMS OF FH‬‬
‫‪.2‬فرم هموزیگوت که در آن بیمار دو آلل جهش یافته دارد که به‬
‫هم‬
‫اتوزومال‬
‫اختالل‬
‫نوع‬
‫این‬
‫اصطالحا‬
‫بارز )‪ (codominant‬نیز گفته می شود ‪.‬شیوع این فرم‬
‫نسبت به فرم هتروزیگوت بسیار کمتر بوده و در حدود یک تولد‬
‫در هر میلیون تولد می باشد ‪.‬مبتالیان به این فرم بایستی در‬
‫سنین بسیار پایین تشخیص داده شود چراکه اول نسبت به‬
‫درمانهاي معمول پاسخ خوب نمی دهند و در ثانی در صورت‬
‫عدم درمان‪ ،‬خیلی سریع به سمت بیماريهاي قلبی عروقی‬
‫پیشرفته رفته و در سنین پایین ازبین خواهند رفت‪.‬‬
LDL ‫چرخه بیوسنتز و عملکرد گیرنده‬
Studies suggest that the PCSK9 protein
helps control blood cholesterol levels by
breaking down low-density lipoprotein
receptors before they reach the cell surface.
‫‪LDL RECEPTOR‬‬
‫گیرنده ‪ LDL‬از یک پروتئین پیش ساز ‪120‬کیلو دالتونی سنتز می شود ‪.‬پس از‬
‫اینکه توالی ترجمه از روي این پروتئین برداشته شد‪ ،‬جهت پردازش به سیستم‬
‫رتیکولواندوتلیال و دستگاه گلژي منتقل خواهد شد ‪.‬دراین قسمتها پروتئین‬
‫گلیکوزیله شده و نهایتا بشکل گیرنده بالغ به سطح سلول منتقل می شود ‪.‬در‬
‫غشاء در قسمت چاله هاي کالترین‪ ،‬با مولکول کالترین پوشش داده می شود ‪.‬‬
‫پوشش توسط کالترین باعث خواهد شد که گیرنده بتواند مولکولهاي غنی از‬
‫آپولیپوپروتئین ‪E‬و‪ B‬را براحتی شناسایی نماید ‪.‬بالفاصله پس از اینکه گیرنده‬
‫مولکولهاي‪ LDL‬که غنی از این دو آپولیپوپروتئین است‪ ،‬را شناسایی و جذب‬
‫کرد‪ ،‬توسط مکانیسم اندوسیتوز به اندوزومها مهاجرت می کند‪ pH .‬اسیدي‬
‫اندوزومها باعث تفکیک ‪ LDL‬از گیرنده خود شده‪ ،‬گیرنده دوباره به غشاء‬
‫برگشته و وارد چرخه جدید می شود ‪.‬ذرات ‪LDL‬نیز به لیزوزومها منتقل شده‬
‫و در آنجا تخریب خواهند شد‪ .‬دو پروتئین پره پروتئین کنورتاز‬
‫و پروتئین ‪Idol‬از طریق‬
‫‪subtilisin/kexin.‬تیپ‪(PCSK9) 9‬‬
‫کاهش مسیر چرخه مجدد رسپتورها و افزایش تخریب ‪ LDL‬به این مسیر کمک‬
‫شایانی می کنند‪.‬‬
3 GENES AFFECTING LDL CLEARANCE CAN CAUSE
FH
LDL particle
APOB (6 mutations identified)
Codes for production of ligand
protein, ApoB, which connects
LDL particle to receptor
Circulation
Liver cell
LDLR (>1000 mutations) codes for LDL
receptor which binds to ApoB on LDL
particle inducing endocytosis of LDL
PCSK9 (8 GOF mutations identified to
date) codes for PCSK9 enzyme, which
degrades the LDL receptor
Rader DJ, et al. J Clin Invest. 2003;111:1795-1803.
NORMALLY, LDL RECEPTORS ON HEPATOCYTES HELP
TO CLEAR LDL PARTICLES FROM PLASMA
LDL particle
Circulation
Liver cell
Rader DJ, et al. J Clin Invest. 2003;111:1795-1803.
‫ژن و ساختار شماتیک پیش پروتئین گیرنده ‪LDL‬‬
‫‪STRUCTURE OF CODING GENE‬‬
‫نقشه ژنتیکی تهیه شده از ژن کد کننده پیش پروتئین گیرنده ‪ LDL‬نشاندهنده آن است که‬
‫این ژن برروي کروموزوم شماره ‪ 19‬از ناحیه ‪1/13‬تا ناحیه ‪ 3/13‬با ‪45‬هزار جفت باز می‬
‫باشد و گلیکوپروتئینی که از روي این ژن سنتز شده وبعنوان گیرنده‪ LDL‬شرح داده شده‬
‫است‪ ،‬از ‪839‬اسیدآمینه تشکیل شده است‪ .‬این ژن شامل ‪18‬ناحیه اگزون‪17 ،‬ناحیه‬
‫انترون و شش حوزه عملکردي می باشد که سنتز پروتئین را که مشتمل بر سنتز تک زنجیره‬
‫پپتیدي‪ ،‬دومن اتصالی به لیگاند‪ ،‬پیش ساز شبه فاکتور رشد اپیدرمی‪ ،‬جایگاه اتصالی‬
‫کربوهیدراتی)‪ -O‬لینک( ناحیه داخل غشایی و دومن سیتوپالسمی را پشتیبانی می کند ‪.‬‬
‫پیش بینی جایگاه حضور دومن هاي مختلف برروي گیرنده را با تعیین توالی ژنی می توان‬
‫انجام داد ‪.‬با این روش مشخص شده است که هر دومن بوسیله اگزون متفاوت یا گروهی از‬
‫آنها کد می شود ولی اگزون اصلی و کنترل کننده مراحل بلوغ گیرنده هنوز بطور کامل‬
‫مشخص نشده است ‪.‬این مطلب نشاندهنده این امر می باشد که ممکن است مراحل بلوغ‬
‫گیرنده توسط اگزون سایر ژنها صورت گیرد‪ ،‬چون در ساختار پروتئینی گیرنده هاي ‪LDL‬‬
‫قسمتهایی شبیه پروتئین هاي غیرمرتبطی با این گیرنده شناسایی شده است و بهمین دلیل‬
‫است که موتاسیونهاي مختلف و جدیدي هر ساله گزارش شده است که در ارتباط با بیماري‬
‫هیپرکلستروملی فامیلی است‪.‬‬
HISTORY
The Norwegian physician Dr C. Müller first associated the
physical signs, high cholesterol levels and autosomal
dominant inheritance in 1938. In the early 1970s and
1980s, the genetic cause for FH was described by Dr
Joseph L. Goldstein and Dr Michael S.
Brown of Dallas, Texas. Initially, they found increased
activity of HMG-CoA reductase, but studies showed that
this did not explain the very abnormal cholesterol levels in
FH patients. The focus shifted to the binding of LDL to its
receptor, and effects of impaired binding on metabolism;
this proved to be the underlying mechanism for FH.
Subsequently numerous mutations in the protein were
directly identified by sequencing. They later won the 1985
Nobel Prize in Medicine for their discovery of the
LDL receptor and its impact on lipoprotein metabolism.
Michael S.
Brown
Joseph L.
Goldstein
FIVE MAJOR CLASSES OF FH DUE TO LDLR MUTATIONS
Class 1 Mutations: Multiple molecular mechanisms have been
shown to result in the null mutations that comprise the class 1
FH family. The alterations include deletions that eliminate the
LDLR gene promoter. In addition, frameshift, nonsense and
splicing mutations cause the null phenotype.
Class 2 Mutations: There are two subclasses of class 2 mutations
in FH. Class 2A mutations result in an LDLR protein that fails to
be transported out of the ER. Class 2B mutations are "leaky" in
that some of the newly synthesized LDLR protein is transported
to the Golgi but at a reduced rate compared to wild-type. The
class 2B mutations are the more common type in this class of
mutation. Most of the class 2 mutations are clustered in the exons
that comprise the LDL-binding domain. The LDLR protein has a
domain with homology to the epidermal growth factor (EGF)
precursor protein and most of the rest of the class 2 mutations are
found in this EGF precursor homology region.
CONTINUANCE
Class 3 Mutations: Most of the class 3 alleles result from in-frame
rearrangements in the cysteine-rich repeats of the LDL-binding
domain or in the EGF precursor domain. Because there is a
similarity in the class 2 and class 3 mutant alleles, it is difficult to
assess which class of mutation is causing the observed FH
phenotype. To accurately distinguish class 3 and class 2B alleles at
the functional level it is necessary to isolate fibroblasts from the
patient and do in vitro ligand-binding assays.
Class 4 Mutations: All of the class 4 alleles have been shown to
affect the cytoplasmic domain of the LDLR protein. In addition,
class 4 alleles can be divided into two subclasses dependent upon
whether the mutations affect only the cytoplasmic domain or
include mutations in the adjacent membrane-spanning domain.
Class 5 Mutations: Deletion or alteration of the EGF precursor
homology domain results in class 5 alleles. The total percentage of
FH alleles that are of the class 5 type may be underestimated
because the class 5 mutations can produce a phenotype that
somewhat resembles that of class 3 mutations (i.e. deficient LDL
binding).
‫‪EPIDEMIOLOGY‬‬
‫شیوع هتروزیگوتی ‪ FH‬در اروپا مشابه ایالت متحده است اما در مناطق ویژه اي نظیر‬
‫ایسلند و فنالند داراي درصد شیوع بالتري هستند ‪.‬میزان شیوع در کانادائیهاي مقیم‬
‫فرانسه ‪1‬در ‪270‬مورد و مسیحیان لبنانی ‪1‬مورد در ‪170‬است ‪.‬به دلیل تاثیر‬
‫پدیده تفکیک ژنتیکی و جمعیتهاي تقریبا ایزوله‪3 ،‬جمعیت مجزا در افریقاي جنوبی داراي‬
‫شیوع بینهایت بالیی از ‪ FH‬هستند‪ 1 :‬مورد در ‪67‬مورد قوم اشکنازي يهودي و ‪1‬‬
‫مورد در ‪100‬نفر در هر دو جهت سیاهپوستان و سرخپوستان مقیم آفریقاي جنوبی‬
‫دیده می شود ‪.‬درحال حاضر هیچ برآورد صحیحی از مبتالیان به هیپرکلستروملی فامیلی در‬
‫کشورهاي آسیایی وجود ندارد و معمول دراین کشورها بیمارانی که جهت درمان به‬
‫کلینیک مراجعه می کنند‪ ،‬فقط از نظر میزان تري گلیسرید‪ ،‬کلسترول‪LDL ،‬و ‪HDL‬‬
‫مورد بررس ی قرار می گیرند ‪.‬در صورت بال بودن مقادیر این پروفیلهاي لیپیدي بصورت‬
‫موردي درمان می شوند و متاسفانه هیچ پزشکی به خود زحمت این را نمی دهد که‬
‫بیماران را از نظر هیپرکلستروملی فامیلی مورد بررس ی قرار دهند نژاد ‪:‬نژادهاي ویژهاي از‬
‫جمله فنالندي‪ ،‬لبنانی‪ ،‬يهودیان اشکنازي‪ ،‬آفریقایی ها یا کانادائیهاي فرانسوي داراي‬
‫شیوع بالتري هستند‪.‬‬
‫‪SIGN AND SYMPTOM‬‬
‫افزایش کلسترول خون از زمان تولد در هر دو فرم وجود دارد اما‬
‫هموزیگوتها بیماری شدیدتری دارند ‪ .‬اولین تظاهر بالینی این بیماری‬
‫ظهور گزانتوماست که ممکن است به صورت مسطح ‪ ،‬توبروز یا‬
‫تاندینو باشد ‪ .‬گزانتوما به ویژه بر روی تاندون آشیل و تاندون‬
‫اکستنسور دستها ‪ ،‬نوع توبروز آن بر روي آرنجها‪ ،‬زانوها و ساير‬
‫جاها‪ ،‬نوع زير پريوستي آن در زيرزانو در برجستگي استخوان تيبيا و‬
‫آرنج بروز مي كند ‪.‬گزانتوم پوستي برنگ نارنجي روشن يا زرد است و‬
‫بر روي باسنها و دستها‪ ،‬پرده بین انگشتي بین انگشتان اول و دوم و‬
‫گاهي بر روي زبان يا مخاط دهان ظاهر ميشود‪.‬‬
‫‪CLINICAL FEATURE IN‬‬
‫‪HETEROZYGOTE FORM‬‬
‫کودکان و بالغین مبتال به ‪ FH‬از نوع هتروزیگوت‪:‬‬
‫کودکان هتروزیگوت عالئمی ناش ی از بیماریهاي قلبی را نشان نمیدهند و یکی از‬
‫والدین داراي هیپر کلسترولمی بسیار باالست این بیماران سابقه طوالنی از‬
‫هیپرکلسترولمی از زمان کودکی دارند ‪.‬در صورت عدم بروز بیماري قلبی شدید‪،‬‬
‫درصورت مصرف دخانیات عالئم بیشتر بصورت بیماري ایسکمیک قلبی می‬
‫باشد‪ .‬در نوع هتروزيگوت بيماري‪ ،‬گزانتوم تا زمان مرگ توسعه مي يابد و بر‬
‫روي تاندونهايي نظير آشيل روي مي دهد ‪.‬گزانتالسما كه گزانتوم پلكي است‬
‫معموال در هتروزيگوتها و در افرادي با كلسترول طبيعي ديده مي شود‪ ،‬اما‬
‫بندرت درهموزيگوتها مشاهده مي گردد ‪.‬قوس قرنيه هم كه در افرادي با‬
‫متابوليسم چربي طبيعي ديده مي شود‪ ،‬در‪ %10‬هتروزيگوتها تا ‪ 30‬سالگي و‬
‫در ‪ 50 %‬افراد طبيعي باالي ‪ 30‬سال مشاهده مي شود ‪.‬معموال تظاهرات‬
‫باليني بيماري شريان كرونر در دهه چهارم زندگي بروز مي كند‪.‬‬
‫‪CLINICAL FEATURE IN HOMOZYGOTE FORM‬‬
‫کودکان و بالغین مبتال به ‪ FH‬از نوع هموزیگوت ‪:‬‬
‫این بیماران عالئمی شامل بیماريهاي ایسکمیک قلبی‪ ،‬یا بیماريهاي عروقی محیطی‪ ،‬بیماريهاي‬
‫عروق مغزي یا استنوزآئورتی نشان میدهند ‪.‬ازطرفی این بیماران ممکن است عوارض‬
‫شریانی نظیر‪ tendonitis‬یا آرتراژي و وجود ضایعات غیرمعمول پوستی را نشان‬
‫دهند‪.‬‬
‫يك قوس مشابه قوس پیري در قرنيه در افراد هموزيگوت مبتال قبل از ‪ 10‬سالگي ديده‬
‫مي شود ‪.‬نتيجه باليني بسيار مهم ابتال به اين بيماري‪ ،‬وقوع اترواسكلروز شديد شريان‬
‫آئورت و شرائین كرونر و عروق محيطي و مغزي بطور زودرس مي باشد بطوريكه در‬
‫بيماران‪ ،‬آنژين باليني در ‪ 5‬سالگي و سكته قلبي در ‪ 18‬ماهگي و‪ 3‬سالگي گزارش گرديده‬
‫است و اغلب بيماران تا ‪ 30‬سالگي بعلت اين گرفتاري مي میرند ‪.‬مگر آنکه با روشهاي‬
‫غیرمعمول از قبیل پیوند کبدي‪ ،‬آفرز‪ LDL-C‬یا تحت عمل جراحی باي پسایلئوم قرار‬
‫گیرند‪.‬‬
‫رسوب گزانتوم بر روي اندوكارد و دريچه هاي ميترال و آئورت منجر به تنگي و نارسايي آنها‬
‫مي شود ‪.‬حمالت راجعه التهاب مفصلي يا تنوسينويت در قوزك پا‪ ،‬مچ دست و مفاصل بین‬
‫انگشتي پروگزيمال‪ 3-12‬روز طول مي كشد و سپس خودبخود خاموش مي شود‪.‬‬
WHAT OTHER GENES ARE RELATED TO HYPERCHOLESTEROLEMIA?
Less commonly, hypercholesterolemia can be caused by mutations in the
APOB, LDLRAP1, or PCSK9 gene. Changes in the APOB gene result
in a form of inherited hypercholesterolemia known as familial
defective apolipoprotein B-100 (FDB). LDLRAP1 mutations are
responsible for another type of inherited high cholesterol, autosomal
recessive hypercholesterolemia (ARH). Proteins produced from the
APOB, LDLRAP1, and PCSK9 genes are essential for the normal
function of low-density lipoprotein receptors. Mutations in any of
these genes prevent the cell from making functional receptors or
alter the receptors' function. Hypercholesterolemia results when lowdensity lipoprotein receptors are unable to remove cholesterol from
the blood effectively.
Researchers are working to identify and characterize additional genes
that may influence cholesterol levels and the risk of heart disease in
people with hypercholesterolemia
The PCSK9 gene provides instructions for making a protein that helps regulate
the amount of cholesterol in the bloodstream.
The LDLRAP1 gene (also
known as ARH) provides instructions for making a protein that helps remove
cholesterol from the bloodstream
PCSK9 MUTATIONS INCREASE DEGRADATION
OF LDL RECEPTORS, LIMITING BINDING AND
ENDOCYTOSIS
LDL
particl
e
ApoB
LDL
recepto
r
PCSK9
Normal
Rader DJ, et al. J Clin Invest. 2003;111:1795-1803.
LDL receptors
degraded at a faster
rate by increased
PCSK9 activity
FH: PCSK9+
APOB MUTATIONS ALTER SHAPE OF APO B LIGAND ON
LDL, IMPEDING ABILITY TO “GRAB” THE LDL RECEPTOR
LDL
particl
e
ApoB
LDL
recepto
r
Mutation impairs
ApoB-binding ability
to LDL receptor
Normal
Rader DJ, et al. J Clin Invest. 2003;111:1795-1803.
FH:
APOB-
‫‪IDENTIFICATION OF MUTATIONS‬‬
‫‪CAUSING FH‬‬
‫بررس ی به روش ‪Southern blot‬در ژن ‪LDLR‬قادر به‬
‫شناسایی نقایص عمده در ژن نمیباشد‪ ،‬ولی انجام آزمایشات‬
‫‪PCR-SSCP‬قادر به تشخیص دو الگوي غیرعادي در اگزون‬
‫شماره ‪5‬است ‪.‬همچنین تعیین سکانس ‪DNA‬روي محصولت‬
‫‪PCR‬بیانگر یک نوع حذف جدید هفت جفت بازي ‪756 del‬‬
‫)‪ )7‬درنوکلئوتید ‪756‬در ‪cDNA‬است که در افراد‬
‫هوموزیگوت دیده می شود ‪.‬این نوع جهش انحراف قالب باعث‬
‫ایجاد یک کدون توقف در موقعیت ‪241‬می گردد و یک نوع‬
‫پروتئین بریده و ناقص تولید مینماید ‪.‬در انجام ‪PCR‬‬
‫والکتروفورز‪ ،‬دو باند دیده میشود‪ ،‬یک نوار ‪180‬جفت بازي‬
‫طبیعی و یک نوار موتانت ‪173‬جفت بازي ‪.‬ولی باید در نظر‬
‫داشت که رابطه فنوتیپ –ژنوتیپ در افراد هتروزیگوت کم است‪.‬‬
‫‪‬در مطالعات انجام شده توسط ‪ )1999) Jensen HK‬در دانمارك ‪،‬جهش‬
‫منحصر به فرد دیگري در یک بیمار ‪FH‬به شناسایی شده است شکل هش مضاعف‬
‫‪C292W*1‬و ‪K290R‬که ‪5‬نوع جهش غالب به صورت ‪،W23X W66G‬‬
‫‪313 +1G ® A ،. 1846 -1G ® A ،W556S‬وجود داشت‪.‬‬
‫‪‬در مطالعه دیگر که توسط ‪ van leuven‬و همکارانش(‪ )2001‬انجام شد‬
‫اگزون شماره ‪ 4‬که از جهش شناخته شده قبلی متفاوت است ‪21 insertion‬‬
‫جفت باز که به عنوان ‪ FH Tulsa-1‬شناخته شده است ‪.‬‬
‫‪‬انواع جهش های شایع از نوع نوترکیبی ‪ ،‬انحراف کدون ( ‪ )frame shift‬و‬
‫جهش های بی معنی(‪ )non sense‬می باشند که کامال بیماریزا بوده و برخی‬
‫جهش های کوچک حذفی داخل قالب کامال بیماریزا نیستند مانند جهشهای‬
‫‪N543H‬و‪ ، 2393del9‬همچنین جهش از نوع ‪ splice site‬مانند‪:‬‬
‫‪ 1592+5G ®A‬این جهش ها باید تحت بررس ی های دقیق ‪mRNA‬واقع‬
‫شوند تا بیماریزا بودن آنها کامال ثابت گردد‪.‬‬
‫در نقص ارثی آپولیپوپروتیین ‪ B‬جهش ‪ R3500Q‬عالیمی مشابه ‪ FH‬ایجاد می کند اما‬
‫عالیم خفیفتر از نقص در ساختمان گیرنده ‪ LDL-C‬است‪ .‬مطالعات مشابه توسط‬
‫‪ Wang J‬و ‪ Huff E‬در ایالت های مختلف کانادا انواع دیگری از جهش ها را مشخص‬
‫ساخته است‪ .‬از جمله حذف های داخل چارچوب و حذف یک آمینواسیدی (هر یک در‬
‫اگزون ‪2‬و‪ )4‬و دو حذف بزرگتر که باعث لغزش چارچوب می گردد (هر یک در اگزون های‬
‫‪4‬و‪ ، )10‬پنج جهش با معنی اشتباه( ‪، A370T، T413M ،L562P ،E760D‬‬
‫‪ )C42R‬و دو جهش ‪( splice acceptor‬هر یک در اینترون های ‪3‬و‪.)18‬‬
‫جهش های دیگری در جمعیت سن پترزبورگ روسیه توسط ‪ Chakir R‬و‬
‫همکاران گزارش شده است که از نوع ‪ 347delGCC‬و ‪ E397X‬می باشند‬
‫و در جمعیت چین ‪ Pang Qf‬و همکاران جهش های دیگری به شکل‬
‫‪ C255R ،R3500Q‬از انواع جدیدی بوده است که گزارش نموده اند‪.‬‬
‫همانطور که مشاهده می شود هتروژنیستی بسیار وسیعی در ژن ‪ LDLR‬و سایر‬
‫ژن های مرتبط وجود دارد که باعث پیچیدگی بیماری ‪ ،‬تشخیص و نهایتا درمان‬
‫موثر آن می شود‪.‬‬
THE MOLECULAR DIAGNOSIS OF MUTATIONS
PCR- ‫ روش‬: ‫ از نطر جهش های شایع‬LDLR ‫بررس ی روی ژن‬
DNA ‫ و تعیین توالی مستقیم‬Southern blot ‫ و‬SSCP
‫ و‬R3500Q ‫ برای جهش های شایع‬Apo B ‫بررس ی روی ژن‬
.‫ استفاده می شود‬PCR-RELP ‫ از روش‬R3531C
.1
.2
Among different relative laborious and expensive scanning methods for unknown
gene mutations we have shown that the polymerase chain reaction (PCR) singlestrand conformation polymorphism (SSCP) analysis is a highly efficient and sensitive
technique for detection of mutations in the 18 exons including intronic splice-site
sequences and the promoter region of the LDL receptor gene, reserving DNA
sequencing to the exons revealing variant SSCP patterns. Southern blot analysis or
long distance PCR analysis are necessary to identify large gene re-arrangements in
the LDL receptor gene in FH patients in whom SSCP analysis did not reveal any
smaller sequence alterations.
Special thanks

similar documents