Présentation pré-lab

Report
BIO1540 Lab 3:
Processus cellulaires
chez Amoeba proteus
Objectifs
• Identifier, photographier et mesurer les organites
présentes dans Amoeba proteus.
• Visualiser des processus cellulaires tels que le
mouvement amiboïde, le cycle de la vacuole
contractile et l’endocytose.
• Mesurer le diamètre de la vacuole contractile au
cours de son cycle.
• Utiliser ces mesures pour tracer un graphique
montrant la variation du volume de la vacuole en
fonction du temps.
Méthode (mise en place)
• Connecter délicatement la caméra du
microscope au câble de l’ordinateur.
• Nettoyer les surfaces optiques du
microscope (lentille du condenseur,
oculaires, objectifs et lampe) à l’aide de
Kimwipes
Observations au Microscope
1. Garder une intensité lumineuse relativement
faible.
2. Ne laissez pas la préparation sécher
3. Ne touchez pas la lamelle couvre-objet
Partie I: Anatomie de l’amibe
Identifiez les structures et organites présentes
dans la liste « structures amibe » (LabWeb):
• Localisez une amibe sur votre lame en
utilisant l’objectif 4x, puis passez au 10x puis
au 40x pour observer les détails.
• Des questions sur l’anatomie de l’amibe
seront posées pendant l’examen de
laboratoire.
plasmalemme
endoplasme
capuchon hyalin
vacuole digestive
uroïde
ectoplasme
vacuole
contractile
noyau
repas
Partie II: Mouvement Amiboïde
Votre tâche:
• Sous l’objectif 10x, observez la formation et
l’élongation d’un pseudopode.
• Passez au 40x et observez le flux de
l’endoplasme granuleux.
• Regardez la vidéo sur le site Digizoo.
• Prenez des photos et faites des schéma,
représentez le flux de l’endoplasme fluide par
des flèches.
Partie II: Mouvement Amiboïde
Astuces:
• Localisez une amibe sur la lame en utilisant
l’objectif 4x.
• Fermez le diaphragme d’ouverture (sur le
condenseur) vers la gauche pour augmenter le
contraste (pas complètement ou l’image sera trop
sombre).
• Passez ensuite à l’objectif 10X ou 40X pour
observer l’amibe avec le niveau de détail désiré
Partie III: Cycle de la vacuole
contractile
Votre tâche: Mesurer le diamètre de la vacuole
contractile (en µm) durant son cycle.
Vacuole contractile (VC):
• Fonction: osmorégulation et élimination des déchets.
• Durée: environ 5 minutes à 20°C (cycle augmente avec
la température).
• Emplacement: variable
• Composantes du cycle:
• Diastole: croissance continue
• Systole: expulsion du contenu dans le milieu extérieur.
Partie III: Cycle de la vacuole contractile
Partie III: cycle de la VC
t=0
Systole
t=5-8 minutes (300-480s*)
*Arrétez les
mesures après
480s
t=30 s
Pas de vacuole visible
(diamètre=0)
t=60-120 s
Des petites vacuoles
s’agrègent puis fusionnent.
Vacuole Contractile – Méthodes
• Identifiez une VC à l’objectif 10x.
• Passez à l’objectif 40x.
• Observez la VC pendant au moins un cycle
complet avant de commencer les mesures.
• Le t=0 correspond au moment de la systole
(=la vacuole disparaît).
Vacuole Contractile – Méthodes
• Photographiez la VC toutes les 30 secondes
jusqu’à 480 secondes maximum.
• Sauvegardez vos images dans un dossier:
K:/BIO1540/BIO1540XX au format JPEG
• Attention: sauvegardez vos images au fur et à
mesure ou vous les perdrez
• Une fois les 2 cycles terminés, mesurez le
diamètre en µm de la VC sur chaque photo
• Les images utilisées pour la mesure du diamètre
doivent être prise à l’objectif 40X
Vacuole Contractile – Méthodes
• Entrez vos données (2 cycles) dans le fichier
Excel.
• Les diamètres seront convertis en volumes, et
la moyenne et l’erreur-type seront calculés
automatiquement sur la feuille Excel.
• Les données de la classe seront disponibles
demain sur la page « Lab3 » du site web des
laboratoire (PAS BBLearn)
Partie IV: Endocytose
•
•
•
•
Démontez la lame contenant les amibes. Ne jetez pas la lame.
Jetez les lamelles dans les béchers situés au centre des bancs.
Allez à la station ‘endocytose’ (demandez à votre TA).
Attrapez 1 ou plusieurs amibes dans le flacon et transférez-les
dans la plaque multi-puits avec le minimum de liquide
• Ajoutez 2 gouttes de solution inductrice sur les amibes.
• Attendez 1-2 minutes.
• Transférez 1 amibe dans la lame “porte amibe”, placez une
lamelle et observez la formation de canaux endocytiques sous le
microscope (40X).
Budget-temps
• Quiz Lab3 – 10 minutes
• Présentation du laboratoire - 15 min.
• Observation des Amibes – locomotion –
anatomie – 45 minutes
• Mesure de cycles de la vacuole contractile - 75
min.
• Endocytose – 10 min.
• Instruction pour le rapport / question / nettoyage
des bancs et microscope – 10 min.
Rapport Lab3:
Page de titre + Graphique
• Graphique: Tracez un graphique (nuage de points) représentant
le volume de la VC (moyenne de la classe et erreur type)
pendant 1 cycle (t=0 à 480 secondes).
• Utilisez les données combinées affichées sur le site web des labs.
• Suivez les instructions postées sur le site web, et l’annexe I du
manuel de laboratoire.
• Utilisez du papier millimétré.
• Incluez une légende située sous le graphique (cf. manuel)
• Date de remise: 1 semaine après le lab.
• Les données combinées seront disponibles demain sur le site
web des laboratoires.
Rappels
• Pour ne pas perdre de points techniques:
– Rincez la lame « amibe » et remettez-la dans le plateau où
vous l’avez prise. Jetez les lamelles dans le bécher prévu à
cet effet.
– Effacez tous les fichiers que vous avez sauvegardés
– Nettoyez votre banc de travail
– Nettoyez les surfaces optiques du microscope si vous avez
versé du liquide
– Montrez votre banc à votre Démonstrateur/trice avant de
partir.
N’oubliez pas: mini-quiz au début du lab4

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